MUCOS Pharma CZ

Xiang¹ G., Schinzel¹ R., Simm¹ A., Münch¹ G., Sebekova² K., Kasper³ M., Niwa⁵ T.,  Schmitz⁴ Ch. and Heidland¹ A.

1Department of Internal Medicine and Institute of Physiological Chemistry, University of Würzburg, ³Institute of Anatomy, University of Dresden, ⁴Department of Anatomy and Cell Biology, RWTH University of Aachen, Germany, ²Institute of Preventive and Clinical Medicine, Bratislava, Slovakia and ⁵Nagoya University Daiko, Medical Centre, Nagoya, Japan

Nephrol Dial Transplant 2001, Vol. 16, pp. 1562-1569

555 KA 

---

Abstrakt

Konečné produkty pokročilé glykace (AGEs) jsou považovány za klíčové faktory v patogeneze diabetické nefropatie (DN). Jelikož je málo známo o jejich účincích na tubulární buňky, sledovali jsme u LLC-PK1 buněk: (i) zda komplex AGE s bovinním sérovým albuminem AGE-BSA narušuje buněčnou proliferaci a expresi TGF – b 1 ; a (ii) zda účinek vyvolaný AGE lze modulovat trypsinem interferujícím s vazebnými proteiny na buněčném povrchu.
Metody. Izolované buňky byly vystaveny vehikulu (kontrola), AGE-BSA (19-76 mM) a BSA (38 mM) v přítomnosti nebo nepřítomnosti trypsinu (0.625-5.0 mg/ml) (2.5 mg/ml) po dobu 24 hod. Hodnotili jsme buněčnou proliferaci stanovením počtu buněk a inkorporace [³H]thymidinu, expresi TGF pomocí RT-PCR, a protein TGF-b1 ELISOU. Navíc byla v buňkách sledována akumulace AGE imunohistochemickým barvením AGE imidazolonu.
Výsledky. AGE-BSA inhiboval inkorporaci [³H]thymidinu, snížil počet buněk a zvýšil obsah buněčného proteinu stejně jako TGF mRNA (a protein) 0 ve srovnání s kontrolou a pouhým BSA. Imunohistochemické barvení odhalilo významnou intracelulární akumulaci AGE - imidazolonu. Společná inkubace AGE-BSA s trypsinem zmírnila narušenou inkorporaci thymidinu, snížení počtu buněk a zvýšení obsahu buněčného proteinu. Nadměrná exprese TGF – b 1 byla normalizována, zatímco protein TGF – b 1 nevýznamně poklesl. Intracelulární akumulace AGE - imidazolonu byla nápadně potlačena.
Závěr. V buněčné linii LLC-PK1 vykazuje AGE-BSA antiproliferativní účinek, pravděpodobně díky nadměrné produkci TGF b 1. Přítomnost trypsinu rušila tuto změnu, velmi pravděpodobně v důsledku interakce s AGE-vazebnými proteiny, což bylo podpořeno snížením intracelulární akumulace AGE. Uvedená zjištění by mohla být motivem k vývoji specifických proteolytických enzymů rušících nežádoucí interakce mezi AGE a jejich receptory/vazebnými proteiny.